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開學新搭子已就位!小貝帶你逆襲成‘離心大師’~

點擊次數:231 更新時間:2025-08-22
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第一期


離心原理與常用術語


一句話簡述——離心是什么?


離心技術是一種利用高速旋轉所產生的離心力場,依據不同組分沉降系數的差異,實現樣品分離、分析、濃縮與純化的物理方法,廣泛應用于科研、醫療及工業領域。

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離心常用術語


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沉降系數是生物大分子極其重要的物理參數,通過它可以了解生物大分子的相對分子量、分子形狀和水化程度等(圖1)。早在1940年,Svedberg和Pedersen發展了用分析超速離心技術來測量生物大分子的沉降系數和分子量,直至現在,分析超速離心方法仍然是測定生物大分子沉降系數的金標準。


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圖1. 重力作用下混合顆粒的沉降:顆粒沉降的速度依賴于顆粒的大小,大顆粒則先沉降到底部,而小顆粒則停留在容器的上部


Svedberg在實驗過程中定義了沉降系數(S,Svedberg):S就是單位離心加速度的作用下顆粒移動的速度。用以下公式表示:


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由于大部分的生物大分子的沉降系數都在10-11-10-13s(秒)范圍內,故定義了沉降系數的單位S,1 S=1x10-13 s(秒)。S值經常被用來描述生物大分子(如核酸、蛋白)和一些大分子復合物(如核糖體、核糖體亞基),參見圖2。蛋白的沉降系數在1-20 S之間,核酸的沉降系數在5-100 S之間,亞細胞器的沉降系數則更大,基本在幾百S到幾千S之間。


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圖2. 生物顆粒的沉降系數

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盡管有些生物顆粒可以在重力場(1×g)作用下實現分離,如人血細胞,將處理過的血細胞置于桌上1-2小時,由于不同細胞的大小不一樣,白細胞和紅細胞能自動分層。但若需分離更小的生物顆粒,遠大于重力的力則是必須的,這可以通過沿軸旋轉裝有懸浮顆粒的離心管來實現。顆粒在放射狀的離心力下從軸心向外運動,使離心管旋轉的機器就是離心機,而裝載了離心管并帶動離心管沿軸旋轉的即是轉子。


不管是細胞還是生物大分子受到離心力都可以用以下公式計算:


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但是通常情況下,旋轉的轉子受到的放射狀的力都是由相對離心力 (RCF:Relative centrifugation force) 來衡量的。而所謂的相對離心力即是離心力與重力之比,用以下公式表示:


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結合公式 (2) 和公式 (3) ,可得到同一轉子的轉速(RPM)與相對離心力(RCF)之間的關系:


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由于轉子的形狀及設計,離心管中從管頂至管底各點到旋轉中心的距離是不同的,為了計算相對離心力的數值可用平均相對離心力來表示,即同一離心轉子部和底部所受離心力的平均值。科技文獻中離心力的數據通常是指其平均值(RCFav),即離心管中點的離心力


而各廠家在標注離心機和轉子等的最大相對離心力(RCF)時,一般都是用的最高轉速下、最大半徑處(Rmax)的相對離心力。請注意區分這個參數與平均離心力(RCFav)的差異。

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轉子的k值,又稱k因子或k系數,用以衡量轉子的沉淀效率


所有的離心機廠家在轉子出廠時都計算了制備型轉子的k值,轉子k值通過在轉子運行至最高轉速、離心管裝滿樣品時計算得到的,其計算公式如下:


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由于將公式 (5) 代入公式 (6) ,可得到以下轉子k值的計算公式:


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由上得出轉子k值是與轉子的最高轉速轉子的形狀有關。最高轉速完全一樣的轉子,離心管與軸的角度越小,也就是rmax/rmin越小,k值就越小。


所以制備型超速離心機的四類轉子的k值如下:水平轉子k值>定角轉子k值>近垂直轉子k值>垂直轉子k值(圖3)。


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圖3. 四類轉子k值比較,水平轉子k值>定角轉子k值>近垂直轉子k值>垂直轉子k值


如果在離心時,轉子沒有運行到最高轉速,那么rpm就不能使用最高轉速的k值,必須將轉子實際運行轉速代入公式 (7) 來計算實際的k值。


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已知某轉子k值和顆粒的沉降系數,可以計算出用該轉子分離顆粒時所需要的時間。公式如下:


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由公式 (9) 可以看出,對于沉淀同一顆粒,轉子k值越小,顆粒沉淀所需要的時間就越短,也就是離心效率越高;反之,轉子k值越大,顆粒沉淀所需要的時間就越長,轉子的離心效率越低。


如果已知一個轉子k值和沉淀所需要的時間,如果用另一個轉子來沉淀同樣的顆粒,可以用以下公式來計算需要沉淀的時間:


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如果該轉子不是在最高轉速下運行,或者樣品沒有裝滿,又或者換用了其他更小的離心管(例如g-MAX管等),相應k值都會發生改變,相應離心所需的時間也需要重新計算。


我們對三臺最大轉速并不相同的轉子進行了實驗對比,發現相對離心力最高的轉子并不代表離心時間更短,K因子最小的轉子則會表現出更高的離心效率及更少的時間(圖4-5)。因此,在選擇轉子型號時,不能單看轉速 (RPM) 、相對離心力 (RCF) 等參數,而是應該參考能反映出最真實情況的k值。因為K因子是衡量轉子離心效率的統一標準,其與離心時間成完全正比,即K因子越小所需離心時間越短。


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圖4. 對三臺最大轉速并不相同的轉子進行了實驗對比,發現K因子最小的轉子則會表現出更高的離心效率及更少的時間


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圖5. 三臺不同轉速的轉子離心40 L樣品所需的時間對比

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